高效液相色譜（HPLC）是一門基礎(chǔ)分析學(xué)科，有許多名稱相似的概念。今天小編就帶大家區(qū)分一些易混淆的常見液相色譜概念。

1、水峰&倒峰

要知道，在液相色譜中，水出峰通常是作為溶劑出峰，因此在出峰的時間上通常都是位于溶劑峰的位置（0~5min之間）。峰形上，相比于其他有機(jī)溶劑的溶劑峰，水峰多表現(xiàn)為明顯的基線波動，甚至為倒峰；

而色譜分析中的倒峰則不僅僅局限于水溶劑峰，因此倒峰可能在色譜分析的任何位置出峰。這種情況下，引起倒峰的原因多為在此波長下有造成負(fù)吸收的雜質(zhì)通過檢測器，或更有甚者，檢測器的電極接反了。

2、溶劑峰&空白峰

溶劑峰，顧名思義就是溶解樣品溶劑出的峰。如樣品用甲醇溶解，單獨(dú)進(jìn)甲醇溶劑的峰即是溶劑峰；

空白峰和溶劑峰這兩個概念經(jīng)常被分析工作者混淆，但嚴(yán)格來說，空白峰指的是樣品基質(zhì)本底的出峰情況（即空白基質(zhì)樣品），并不僅僅指溶劑峰。若是簡單的小分子極性化合物，溶劑峰和空白峰在譜圖上通常無較大區(qū)別；而若是蛋白、食品等基質(zhì)本底干擾不可忽略的樣品，空白峰往往比溶劑峰要復(fù)雜。

3、進(jìn)溶劑空白&進(jìn)空針

既然講到了空白峰，那就不得不多說一句。我們在進(jìn)行常見色譜峰異常問題排查的過程中，經(jīng)常需要尋找異常峰的來源，這時就經(jīng)常要進(jìn)行兩個步驟：

1. 進(jìn)空針；

2. 進(jìn)溶劑空白。這兩步的概念千萬不可混淆。進(jìn)溶劑空白很好理解，指進(jìn)空白溶劑；進(jìn)空針指的是儀器空運(yùn)行一針，相當(dāng)于運(yùn)行一針流動相，不是指進(jìn)空白溶劑，也不是指拿下色譜柱接兩通進(jìn)樣。

若色譜運(yùn)行過程中出現(xiàn)異常峰，建議各位老師按照先進(jìn)空針，再進(jìn)溶劑空白的順序排查。若進(jìn)空針無異常，進(jìn)溶劑空白也無異常，說明異常峰來源于樣品本身（基質(zhì)本底）；若進(jìn)空針無異常，進(jìn)溶劑空白有異常，說明異常峰來源于溶劑空白；若進(jìn)空針有異常，說明異常峰來源于系統(tǒng)污染（包括儀器、管路、進(jìn)樣系統(tǒng)、流動相），或色譜柱污染。

4、鬼峰&干擾峰

鬼峰(Ghost peak)：是對未知來源的色譜峰的統(tǒng)稱。色譜分離過程中，特別是在梯度洗脫或者儀器使用時間過久容易產(chǎn)生時有時無的色譜峰，因此鬼峰大的特點(diǎn)就是“飄忽不定”，“神出鬼沒”，這種特性通常體現(xiàn)在保留時間不穩(wěn)定和峰面積不穩(wěn)定上。鬼峰的來源有很多，但流動相梯度變化產(chǎn)生的鬼峰是棘手，也zui常見的：

而干擾峰因?yàn)橐呀?jīng)知道是來源于污染物的干擾，因此干擾峰與鬼峰大的區(qū)別就是干擾峰往往出峰時間較為固定（有時候峰面積甚至都沒太大變化）。因此面對干擾峰，我們就從色譜柱污染、樣品污染、試劑污染、流動相污染這幾個方面來排查就好了。

5、重復(fù)性&重現(xiàn)性

重復(fù)性（repeatability）與重現(xiàn)性（reproducibility）都是用來評價分析結(jié)果的精密度，二者都是用分析結(jié)果的RSD值來表示，但二者的實(shí)際意義是不一樣的。

重復(fù)性：是指同一分析人員在同樣實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，相同實(shí)驗(yàn)條件所得的分析結(jié)果的精密度；

重現(xiàn)性：是指不同分析人員或不同實(shí)驗(yàn)室，在各自的實(shí)驗(yàn)環(huán)境下，相同實(shí)驗(yàn)條件所得的分析結(jié)果的精密度；

相比重復(fù)性，重現(xiàn)性提出了更高的精密度要求。重復(fù)性好，重現(xiàn)性未必好；而重現(xiàn)性好，重復(fù)性則一定好。對現(xiàn)代儀器分析而言，重復(fù)性是容易實(shí)現(xiàn)的，而重現(xiàn)性的實(shí)際意義更大，也是方法驗(yàn)證所必須考察的。

6、柱床塌陷&相塌陷

柱床塌陷又叫填料塌陷，是指色譜柱使用一段時間后色譜柱入口處的柱床產(chǎn)生可見的空隙。該空隙的存在增大了死體積，會導(dǎo)致色譜柱柱效下降。造成柱床塌陷的原因如下：

一，色譜柱填裝時的壓力過低，填裝不緊密，在高壓下使用一段時間，開始出現(xiàn)空隙；

二，操作壓力超出色譜柱填料的耐壓值，導(dǎo)致填料顆粒破碎產(chǎn)生空隙；

三，流動相（如pH>8.0）溶解填料導(dǎo)致空隙出現(xiàn)；

四，流動相（如pH<1.5）使得鍵合相脫落，填料松動；

鍵合相塌陷是指由于流動相極性與鍵合相極性相差太大，鍵合相無法在流動相中充分伸展而倒伏、纏結(jié)在一起，比如普通C18在高比例水相條件下。相塌陷會導(dǎo)致色譜柱對化合物的保留不足。單純的相塌陷不會導(dǎo)致柱床填料的損壞，且通?？苫謴?fù)。

以上是我們在進(jìn)行高效液相色譜實(shí)驗(yàn)中常易產(chǎn)生混淆的概念。HPLC技術(shù)如今已廣泛應(yīng)用與食品、醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域，注意理清基本概念將極大程度幫助我們節(jié)省分析成本。小伙伴們在HPLC分析中有任何疑問，歡迎咨詢我們的當(dāng)?shù)劁N售或經(jīng)銷商。