Xtimate® Sugar-H保護(hù)柱是采用磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填裝制成的氫型強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱的保護(hù)柱,對(duì)在同類型分析柱上有強(qiáng)保留和不可逆吸附的物質(zhì)進(jìn)行保留,并對(duì)固體顆粒物進(jìn)行有效阻擋,有效的延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。
使用步驟
1. 將Xtimate® Sugar-H保護(hù)柱連接在分析柱和進(jìn)樣器之間;
2. 設(shè)置流速在0.2-0.3ml/min直到柱溫達(dá)到分析溫度;
3. 在柱溫達(dá)到分析柱溫時(shí),流速增至分析流速,流速變化應(yīng)該以0.1ml/min為增量,待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。zui大流速應(yīng)使壓力不超過(guò)1500psi。
流動(dòng)相要求
常用5 ~10 (mmol/l)的硫酸作為流動(dòng)相。推薦的流動(dòng)相用去離子的無(wú)菌水配制,水應(yīng)去離子化,大于2兆歐的電阻率,水中應(yīng)不含多價(jià)離子,尤其是過(guò)渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過(guò)0.45μm或更小孔徑的濾膜除去細(xì)菌和其它顆粒,溶劑過(guò)濾推薦使用溶劑過(guò)濾器,合適的濾膜為Millipore的HAWP04700。
雖然流動(dòng)相已經(jīng)在真空過(guò)濾時(shí)脫氣,但還是應(yīng)該通過(guò)以下程序來(lái)*脫氣。如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天,請(qǐng)將流動(dòng)相置于錐形瓶中,放在攪拌器/電爐上,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā),用前將流動(dòng)相燒至沸點(diǎn)幾分鐘,使用時(shí)保持溫度70-90℃。這個(gè)操作能夠保證氣體(尤其是 CO2)不再重新溶解在流動(dòng)相中,同時(shí)也會(huì)防止微生物的滋生。
要保持裝流動(dòng)相的容器干凈,有蓋,且新鮮,流動(dòng)相需每24小時(shí)重新配制。
注意事項(xiàng)
通常推薦壓力不超過(guò)1500psi;
zui大流速推薦不超過(guò)0.6ml/min(70℃) ;
流動(dòng)相中有機(jī)相的zui大含量為5%(V/V),樣品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和異丙醇不會(huì)影響柱子的性能;
柱子的溫度不要超過(guò)95℃。通常高溫會(huì)帶來(lái)高的分辨率,但在90-95℃之間幾乎沒(méi)有變化,70℃以下對(duì)于許多糖,就異構(gòu)體的分離來(lái)說(shuō)不能提供足夠的分辨率,對(duì)于乙醇的定量,柱溫應(yīng)在75℃;
柱溫的快速變化不會(huì)對(duì)柱子帶來(lái)什么反作用,如果柱子在60℃以下,那么zui高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時(shí)的高的粘度因此高的流速會(huì)帶來(lái)很高的反壓;
定期反向沖洗保護(hù)柱和分析柱(在每5L流動(dòng)相之后),以延長(zhǎng)色譜柱的壽命;
流速的變化不能超過(guò)0.5ml/min,流速變化應(yīng)該緩慢進(jìn)行,建議改變流速時(shí)以0.1ml/min為增量,直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。任何的流速變化均要在不超過(guò)0.5ml/min下進(jìn)行;在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設(shè)定應(yīng)比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。
保存條件
長(zhǎng)期保存(72小時(shí)以上不用)。關(guān)掉柱溫箱,停泵。當(dāng)柱子冷卻,從系統(tǒng)中移出,換上起初隨柱子的堵頭,柱子在保存過(guò)程中要防止揮干,通常的流動(dòng)相都可作為保存柱子的適宜溶劑。在冰箱中5℃保存(不要冷凍),以防止微生物的滋生;柱子拆掉后要用不銹鋼堵頭裝在系統(tǒng)上,沖洗整個(gè)液相色譜系統(tǒng)先用水,然后用甲醇,zui后系統(tǒng)保存在甲醇中。
在關(guān)機(jī)后的重新啟動(dòng)。當(dāng)開(kāi)啟帶有一個(gè)柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時(shí),打開(kāi)柱溫箱,流速開(kāi)始不要超過(guò)0.2ml/min。待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達(dá)到工作溫度后再按通常的工作條件操作。
整夜的停機(jī)(放置少于72小時(shí))。柱子留在系統(tǒng)中流速降到0.2ml/min。循環(huán)溶劑,將流出的管路插入流動(dòng)相瓶中,如果不想開(kāi)著柱溫箱,那就關(guān)掉泵和柱溫箱讓其冷卻。
在整夜停機(jī)后的開(kāi)啟。打開(kāi)柱溫箱,流動(dòng)相的流速不要超過(guò)0.1-0.2ml/min,保持此流速至少二十分鐘直到達(dá)到柱子工作所需溫度,然后再按照通常分析條件來(lái)設(shè)置。
故障檢查
Sugar-H保護(hù)柱是以樹(shù)脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,如果樣品進(jìn)行了很好的前處理,那么大部分產(chǎn)生的問(wèn)題都和樹(shù)脂填料有關(guān),由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加,脆弱的樹(shù)脂填料可能被泵的波動(dòng)沖到柱子的后篩板處。反壓的增加是否會(huì)發(fā)生,要經(jīng)常檢查在線過(guò)濾器以及保護(hù)柱中是否截留了微粒。如果不是此問(wèn)題,那么很可能是樹(shù)脂部分地堵在了出口端的篩板處,檢查這種情況是否發(fā)生需要關(guān)掉泵,將柱子的流路方向反過(guò)來(lái),然后泵流速開(kāi)到0.1ml/min,20分鐘達(dá)到工作溫度后再設(shè)至工作時(shí)的流速。
柱子的再生步驟
Sugar-H色譜柱的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化,越是天然物(尤其是含有那些重金屬和過(guò)渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品),越需要經(jīng)常地對(duì)柱子進(jìn)行再生,因?yàn)樗鼈儠?huì)與柱子發(fā)生置換。
如果主峰有拖尾,那么柱子需要做以下處理:
配制 500ml的再生溶液(Ca EDTA 500mg/L),把保護(hù)柱和分析柱作為整體將流路方向反過(guò)來(lái),在90℃下以0.5ml/min的流速?zèng)_洗一整夜。再生之后回到正常方向使用,當(dāng)柱子反沖時(shí)很重要的一點(diǎn)是需要
保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗,用冷的溶劑將會(huì)延緩沖洗的過(guò)程;主峰沒(méi)有改善,請(qǐng)更換保護(hù)柱柱芯。